产品名称：外泌体蛋白浓度测定试剂盒

英文名称：Protein Assay BCA Kit

产品编号：297-73101

Protein Assay BCA Kit检测外泌体的蛋白质浓度

Protein Assay BCA Kit是利用二辛可宁酸（BCA）定量检测溶液中的蛋白质浓度的试剂盒，是蛋白质定量检测法中最通用的方法。其原理为，碱性条件下的蛋白质Cu⁺。

Cu⁺与BCA形成络合物，即产生紫色螯合物，蛋白质浓度与紫色螯合物颜色深浅有关，通过测定562 nm处的吸光度，并与标准曲线做比照，即可定量溶液中的蛋白质浓度。

利用MagCapture™外泌体提取试剂盒从细胞培养上清液中提取外泌体，通过Protein Assay BCA Kit高灵敏的检测外泌体中蛋白质浓度。

实验内容及结果

将通过MagCapture™ 外泌体提取试剂盒提取的25 μL外泌体溶液分注于96孔板中，加入 Protein Assay BCA Kit中试剂A和试剂B混合液200 μL。之后60℃孵育30分钟，检测560 nm吸光度（图1）。结果表明，通过Protein Assay BCA Kit的高灵敏度检测，可测定提取后外泌体中蛋白质浓度。

BCA Assay 操作概要

由于外泌体蛋白质浓度相当低，因此BCA测定时不要稀释样品。

1.　将BSA标准溶液按照250、125、62.5、31.25、15.625 μg／mL和空白对照，分别每孔25 μL加到96孔板中。

2. 分别把提取的外泌体和洗脱缓冲液（空白）按照每孔25 μL加入96孔板。

3. 把200μL Protein Assay BCA Kit（产品编号：297-73101）的试剂A盒试剂B混合液（A:B=50:1）加入放有样品的孔板中。

4. 60℃孵育30分钟

5. 室温条件下降低孔板温度