产品信息:

试剂盒组成

LPS背景描述：
◆ 脂多糖（LPS）是革兰氏阴性菌细胞壁外膜的主要成分，结构很复杂、热稳定性极高（在250℃下干热灭菌2h才完全灭活）。受LPS发现的历史原因，如今LPS的概念几乎等同于内毒素（endotoxin）。LPS由多糖链和脂质A组成，不同细菌间的多糖链是高度变化的，决定细菌的血清型；而脂质A主要影响LPS的毒性作用。LPS可以引起免疫刺激的级联反应和机体的毒性病理生理活动，包括释放内毒素引起感染性休克从而导致末梢血管虚脱。临床常通过检测LPS的存在来诊断脑膜炎。
◆ 正是LPS与机体免疫机能的密切关系，生命科学研究常常提取LPS进行相关的研究，如阐明LPS的结构，代谢，免疫学，生理学，毒性，生物合成途径；诱导生长促进因子如白介素的合成与分泌；诱导疾病研究的动物模型如炎症反应，急性肺损伤，
产品描述：
◆ 最常用的LPS提取方法仍然是Westphal,O. (1965)使用的热酚-水法（hot phenol-water method），主要优势在于高产量，但是提取步骤繁琐，费时，以及常受蛋白质和核酸的污染，纯度低等缺点也常困扰科研工作者。
◆ iNtRON提供的LPS提取试剂盒是市场上的一个商品化的产品，排除传统热酚-水法的缺陷，使得科研工作者能够快速方便的从细菌中提取LPS。
产品优势：
∷ 适用性广，能从许多G-菌中提取LPS（见Fig. 2）；
∷ 操作时间短（包括裂解在内，60min内即可完成）；操作简单方便；
∷ 少量细菌即可获得足够的LPS；LPS产量与细菌培养物成正比，一般使用3~5ml培养物LPS产量最高；细菌最佳培养体积1~2ml（OD600=0.8-1.2）
∷ LPS产率高，且重复性好（见Fig.1）；
∷ 提取LPS下游应用广，包括直接用于免疫刺激；
操作步骤：
1）室温离心收获细菌细胞，13，000rpm，30sec。
2）加入1ml裂解缓冲液（Lysis Buffer），剧烈涡旋混匀。
3）加入200μl氯仿，剧烈涡旋混匀10-20 sec，室温孵育5min。
4）4℃，13,000rpm离心10min，转移400μl上清到新1.5ml离心管中。
5）加入800μl纯化裂解液（Purification Buffer），并混匀。-20℃孵育10min。
6）4℃，13,000rpm离心15min。
7）用1ml 70%EtOH洗涤LPS颗粒，并完全干燥。
8）在LPS中加入70μl Tris-HCL（10mM，pH8.0），并超声。