Exosome外泌体研究策略分析--exosome功能研究-技术专栏-「北京博迈斯科技发展有限公司
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Exosome是由多种活细胞分泌的50-100nm的膜性小囊泡,来源于晚期核内体(也称为多囊泡体)的囊泡,是由细胞内多泡体(MVBs)出芽形成,再与细胞膜融合后释放到细胞外基质中。几乎所有类型的细胞都能分泌,广泛存在于各种体液中。不同细胞来源的Exosome所含有的具体成分不尽相同,根据分泌的细胞类型不同,在血液、尿液、羊水、恶性肿瘤、腹水等动物体液中的Exosome通常含有特定的miRNA和蛋白质。因此,Exosome为研究潜在的各种biomarker提供了很好的生物学材料。Exosome参与调控重要的细胞生理活动,在免疫应答、凋亡、血管生成、炎症反应、凝结过程中的作用均有报道,可以成为多种疾病的早期诊断标记物,也能作为靶向药物的载体进行疾病治疗。作为囊泡的一种,Exosome受到越来越多的关注。其分泌过程如图[1]

SBI公司是一家提供外泌体研究所需产品和试剂盒,包括分离,检测和定量试剂盒,探测(表征和分析试剂盒),为广大研究者提供了最新的研究手段。2009年,SBI公司的研究团队们发现了Exosome的巨大研究价值后开发了商业化的外泌体分离试剂盒,期间也一直在壮大Exosome研究团队,提升产品质量丰富产品种类成为的Exosome研究供应商。SBI将会把最新的技术和方法转化成加快您外泌体研究进程的最有力的工具。

外泌体的提取

分离完整的Exosome

FACS磁珠分选

IP高通量免疫沉淀Exosome

不含Exosome的培养基

Exosome的验证分析

抗体

Elisa定量分析

CETP活性定量分析

Exosome RNA的研究

RNA的提取

RNA二代测序建库试剂盒

Exosome功能研究

荧光标记

转染试剂

Ev-Entry system

X PACK 技术

XMIR miRNA packing system

XStamp Exosome Targeting Technology

 

四、Exosome功能研究

(一)荧光标记Exosome

A Exo-Glow Flurescent Label

SBI新产品Exo-Glow试剂盒,能够荧光标记内源的Exosome RNAs为红色,标记内部Exosome蛋白为绿色,从而达到使用荧光显微镜实时追踪Exosome细胞内相互作用和物质运输。

产品信息:

货号

产品名称

规格

价格(元)

EXOR100A-1

Exo-Red Exosome RNA   fluorescent label

20 rxns

4418.00

EXOG200A-1

Exo-Green Exosome protein   fluorescent label

20 rxns

4418.00

EXOC300A-1

Exo-Red + Exo-Green Exosome   cargo fluorescent label Combo Pack (10 rxns of each label)

20 rxns

5038.00

利用Cyto-Trace让细胞分泌带有荧光的Exosome

跨膜蛋白CD9CD63CD81蛋白为Exosomes常见的生物标记蛋白。通过CD63CD9 Cyto-Trace质粒,可以让您研究的靶细胞分泌带有绿色或者红色荧光的Exosomes,以便下游功能性运输研究。该产品可实时追踪蛋白的运输,用于蛋白的共定位研究。

产品信息

货号

产品名称

规格

价格(元)

CYTO120-PA-1

pCT-CD63-GFP (pCMV,   Exosome/Secretory, CD63 Tetraspanin Tag)

10ug

8232.00

CYTO120R-PA-1

pCT-CD63-RFP (pCMV,   Exosome/Secretory, CD63 Tetraspanin Tag)

10 ug

8232.00

CYTO122-PA-1

pCT-CD9-GFP (pCMV,   Exosome/Secretory, CD9 Tetraspanin Tag)

10 ug

8232.00

CYTO123-PA-1

pCT-CD9-RFP (pCMV,   Exosome/Secretory, CD9 Tetraspanin Tag)

10 ug

8232.00

CYTO124-PA-1

pCT-CD81-GFP (pCMV,   Exosome/Secretory, CD81 Tetraspanin Tag)

10 ug

8232.00

CYTO125-PA-1

pCT-CD81-RFP (pCMV,   Exosome/Secretory, CD81 Tetraspanin Tag)

10 ug

8232.00

(二)Exosome转染试剂

Exo-Fect是一种可以将核酸直接转移至分离的到的外泌体中的核酸转染试剂,可将si/miRNAmRNA,甚至质粒DNA转染Exosome后进入靶细胞。操作过程中,只需将核酸与Exo-Fect试剂和分离得到的Exosome混合,形成运载体。整个过程不超过1小时即可将核酸高效转至Exosome中。

产品信息

货号

产品名称

规格

价格(元)

EXFT10A-1

Exo-FectExosome Transfection   Kit

10rxns

3174.00

EXFT20A-1

Exo-FectExosome Transfection   Kit

20rxns

5697.00

(三)EV-Entry System

胞外囊泡(EVs)和Exosome是细胞间通讯的重要方式,用于运输RNA和蛋白质的纳米级载体。EVs可为靶细胞运输外源性物质,EV-Entry system不仅能够增强细胞摄取EVs的效率,同时还可提高提高EVs释放物质至靶细胞细胞质的效率。EV-Entry systemAB两种试剂组成,使用时只需将AB两种试剂和Exosome或者EVs混合即可。整个过程的操作不超过一小时即可完成使EVsExosome高效地将物质运输至靶细胞。

产品信息

货号

产品名称

规格

价格

EVEN105A-1

EV-Entry Reagent System Kit

5 rxns

 

EVEN110A-1

10 rxns

 

(四)XPack Exosome Protein Engineering

XPack技术可将任一蛋白包装至Exosome中,并高效地运输至靶细胞中发挥其生物学作用。SBI公司优化了一特殊的多肽序列可将蛋白靶向介导至Exosome膜上,并将该蛋白包装至Exosome分泌至细胞外。XPack多肽序列已经整合在了XPack克隆和慢病毒表达载体中,可以使报告蛋白或任一兴趣蛋白包装至Exosome。这一“XPack”多肽序列已经包含在XPack慢病毒表达载体系列中选择合适的XPack reporter Ientivectors 或者pre-loaded reporter Exosomes,可实现通过荧光或者发光反应来动态观察Exosomes。此外,研究者可改造含有兴趣的Exosome,并研究Exosome的靶细胞运输。

产品信息

产品编号

产品名称

规格

价格(元)

XPAK510PA-1

XPack CMV-XP-MCS-EF1-Puro   Cloning Lentivector

10ug

 

XPAK530PA-1

XPack CMV-XP-GFP-EF1-Puro   Expression Lentivector

10ug

 

XPAK531PA-1

XPack CMV-XP-RFP-EF1-Puro   Expression Lentivector

10ug

 

XPAK532PA-1

XPack   CMV-XP-Luciferase-EF1-Puro Expression Lentivector

10ug

 

XPAK710PA-1

XPack MSCV-XP-MCS-EF1-Puro   Cloning Lentivector

10ug

 

XPAK730PA-1

XPack MSCV-XP-GFP-EF1-Puro   Expression Lentivector

10ug

 

XPAK731PA-1

XPack MSCV-XP-RFP-EF1-Puro   Expression Lentivector

10ug

 

XPAK732PA-1

XPack   MSCV-XP-Luciferase-EF1-Puro Expression Lentivector

10ug

 

(五)制备包含目的miRNAExosome

不同细胞类型分泌的Exosome含有不同的RNA和蛋白,对于其生物功能的研究很有意义。将特异性的RNA序列选择性包装至Exosome是研究的热点。SBI已经研究了一特殊RNA序列标签能将小RNA包装至Exosome中并分泌至细胞外。XMotif RNA序列标签已经整合到了miRNAanti-miRNA寡核苷酸中,并且已经构建至载体,将介导miRNA包装至Exosome,这一技术为研究Exosome介导的潜在治疗作用的miRNAsanti-miRNAs运输至疾病细胞的功效,提供了有力工具。

(六)靶向运输至特定细胞

SBI开发了“XStamp”技术即Exosome表面呈现系统可将兴趣蛋白高效地定位于改造过的Exosome表面。该技术基于MFG-E8C1C2结构域的C末端融合。与XStamp标签融合的蛋白质序列会在分泌的Exosome表面有效展现能够与之融合的蛋白配体。该技术能够将Exosome表面带上靶细胞的位置标签,并引导Exosome将物质运输至正确靶细胞。

产品信息

产品编号

产品名称

规格

价格(元)

XSTP710PA-1

XStamp cloning and   expression lentivector MSCV-Leader-MCS-C1C2-EF1-Puro

10 ug

 9689.00

XSTP720PA-1

XStamp MLN Exosome Motilin   receptor GI tract targeting lentivector

10 ug

 

XSTP721PA-1

XStamp NCAM Exosome brain   targeting lentivector

10 ug

 

XSTP722PA-1

XStamp BHP1 Exosome brain   homing peptide targeting lentivector

10 ug

 

XSTP723PA-1

XStamp GE11 Exosome EGFR   targeting lentivector

10 ug

 

XSTP724PA-1

XStamp Her2 ligand Exosome   Her2 receptor targeting lentivector

10 ug

 

XSTP725PA-1

XStamp CD40L Exosome CD40   receptor targeting lentivector

10 ug

 10077.00

XSTP726PA-1

XStamp IL2 Exosome IL-2   receptor targeting lentivector

10 ug

 10077.00

 

 

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